产品目录

PEG1000溶液(50%，无菌)主要由PEG1000(CAS号：25322-68-3)、磷酸盐等组成，其作用原理使能够改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处在双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用下，细胞发生融合。PEG1000溶液(50%，无菌)可用作融合剂，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，该试剂经严格无菌处理，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)有众多品种，常见的有PEG400、PEG1500、PEG4000、PEG6000、PEG8000等，聚乙二醇系列产品无毒、无刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并与许多有机物组份有良好的相溶性，具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等，在化妆品、制药、化纤、橡胶、塑料、造纸、油漆、电镀、农药、金属加工及食品加工等行业中均有着极为广泛的应用。依相对分子质量不同而性质不同，从无色无臭黏稠液体至蜡状固体。分子量200～600者常温下是液体，分子量在600以上者就逐渐变为半固体状，随着平均分子量的不同，性质也有差异。从无色无臭粘稠液体至蜡状固体。随着分子量的增大，其吸湿能力相应降低。其中PEG4000和PEG6000常用于促进细胞融合或原生质体融合并有助于生物体(如酵母菌)在转化中摄入DNA。

• MEM培养基、胎牛血清
  
• CO₂培养箱、离心机
  
• HAT、HT、A Media Supplement
  
• 胰蛋白酶消化液

• 应注意无菌操作，避免被微生物污染。
  
• PEG1000溶液较为粘稠时，可37～60℃水浴使其变成溶液。
  
• 体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。
  
• 如需HAT选择系列产品，可选择A Media Supplement(50×)、HT Media Supplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

• 如果变成胶冻状，可37～60℃水浴使其变成溶液。
  
• 单层贴壁细胞：将杂交前体细胞以相同数量（5×10⁴/ml）接种，以适当的培养基培养细胞，待细胞贴壁扩展至汇合成片（80%汇合率）的密度。吸干培养液，加入2mL PEG1000溶液(50%，无菌)，轻轻转动1min使PEG1000溶液覆盖所有细胞。静置1min，加入5mL完全MEM培养液以稀释PEG1000溶液，吸干净稀释的PEG1000溶液，再用5mL MEM培养液洗涤被PEG处理的细胞。吸干净洗液，加入5mL MEM培养液，37℃，5% CO₂培养过夜。24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT选择培养剔除HPRT和TK缺陷细胞。弃上清液，用补加1×HT和1×A的完全培养液重新悬浮细胞。融合12~24h后进行异核体分析，杂交前体细胞在4～5天内发生死亡，对于大多数融合前体细胞而言，10～14天可见杂交细胞克隆。
  
• 悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各1mL（约为1×10⁷）混匀，800g离心10min以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1mL，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮。在离心管中加入1mL PEG1000溶液(50%，无菌)，置于37℃水浴2min，加入5mL提前37℃预热的含10%胎牛血清的MEM培养液，使PEG1000稀释并停止作用。1000g离心5min，弃上清液，加入5mL完全MEM培养液以稀释PEG1000溶液，吸干净稀释的PEG1000溶液。用5mL无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液，重复1次该步骤。加入含有20%的胎牛血清的HAT选择培养液，混匀，将细胞悬液用培养液稀释至5×10⁴/ml，接种于96孔板（每孔0.1mL）或其他器皿中，37℃ 5%CO₂孵育过夜24~48h后选出融合细胞。